Reverse Transcription Kit 提供逆转录酶及预混逆转录缓冲液。

产品内容

Reverse Transcriptase   200U/ul

2× Reverse Transcription buffer                                   

特性

Reverse Transcription Kit是由Reverse Transcription buffer和Reverse transcriptase组合而成，具备很好的RNA依赖的DNA聚合能力。2× Reverse Transcription buffer是预混好的RT反应缓冲液，在该环境下逆转录酶能耐受50℃的反应温度，用户只需加入合适的引物和模板即可进行反应。其中Reverse transcriptase能高效迅速地将5kb以下的RNA模板转化成cDNA。虽然RNase H能够降解RNA DNA杂交链中的RNA，但是其有利于新合成的cDNA释放，因此该逆转录酶保留并限制了RNase H功能使其达到高效逆转录。

用途

1）   快速方便进行first cDNA合成。

2）   cDNA文库建立。

应用指导

使用前请先将试剂混匀并离心，再配制反应体系。酶制品含有50%甘油，使用时需慢慢吸取。

使用方法

First cDNA合成

20ul反应体系的配制：

2×Reverse Transcription buffer              10ul

模板                                                10pg-100ng （viral or total RNA）

引物                                                20-50pmoles

Reverse transcriptase                          200U

ddH2O补充至总反应体积              20ul

反应条件：

42℃或50℃                                    15-60min

94℃                                                 2min

4℃                                ∞

逆转录反应结束后，扩增产物建议保存在-20℃条件下。

注意

随机引物及Oligo dT引物并不是逆转录成功的保证，因此本试剂盒不包括随机引物及Oligo dT引物。

由于复杂结构的RNA可能对逆转录过程产生影响，对于复杂结构的RNA模板，建议将RNA样本先进行热变性处理（65℃，5min处理后立即冰浴）,然后再进行逆转录反应。

配制PCR反应体系时，逆转录产物的加样量不要超过PCR反应体系的1/10，以免逆转录反应体系中的各种成分对PCR反应产生抑制作用。

活性定义

42℃，以Oligo dT引物实施逆转录反应，10分钟内摄入1nmole的dTTP使其成为酸性不溶物的活性为1U。

RNase检测

100U的该酶和0.4ug的病毒RNA在42℃下作用1小时后，病毒RNA电泳分析后无变化。

保存

-20℃恒温保存6个月

运输

2-8℃