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原理及应用介绍:
逆转录病毒主要包括慢病毒(Lentivirus)和鼠白血病病毒(Murine leukemia virus, MLV)。由于这两种病毒研究得比较透彻,在目前没有发明很好的抗病毒药物的同时,科学家们却利用这两种病毒的病毒元件开发了很多实用价值很高的研究材料,其中主要包括逆转录酶和基于逆转录病毒组装系统的系列技术。目前市场上广为使用的逆转录酶主要都是来自MLV及lentivirus,逆转录酶的出现让RNA研究及检测可以方便地通过逆转录产生cDNA然后再借助PCR技术得以实现。有关逆转录酶请参照本公司产品“Reverse Transcription kit, Cat. Z00-k50, -k100, -k200”等。这里主要介绍基于逆转录病毒组装系统的系列技术,逆转录病毒在其生活周期中主要得完成以下生物学过程:
1)gag-pol蛋白通过特殊序列识别自己的RNA基因组并结合;
2)1800-2000(艾滋病毒)个gag-pol蛋白结合两条自己的RNA基因组包装成一个“前病毒颗粒”,准备出牙;
3)相关病毒囊膜蛋白已表达、成熟并呈现在感染的细胞膜表面,“前病毒颗粒”出牙过程中,这些囊膜蛋白就披背在病毒颗粒表面,再通过成熟过程就形成新的病毒颗粒;
4)新病毒颗粒感染宿主细胞后,gag-pol蛋白能将其结合的RNA病毒基因组逆转录成cDNA并变成双链,通过整合酶插入到宿主细胞染色体中,依赖宿主核酸复制过程复制病毒基因组。
 
科学家们利用逆转录病毒组装过程的这些生物学特点,人工制作逆转录病毒颗粒(pseudotyped particle, pp),该颗粒能很好的模拟相关病毒生物学特性的同时,却避免了生物安全、难分离难培养等缺点,为研究等提供了很大的方便。“基于逆转录病毒组装系统的系列技术”往往被简单理解为“逆转录病毒载体”,即,运用逆转录病毒作为基因导入工具。其实,这只是“基于逆转录病毒组装系统的系列技术”中的一个方面。如上图,我们可以从三个大方面利用逆转录病毒组装系统为我们服务:
 
①兴趣点在gag-pol蛋白上,可以运用人工制作的pp代替艾滋病毒实施抗HIV gag-pol蛋白功能药物筛选,也可以运用人工制作的pp,实施逆转录病毒逆转录、整合过程相关研究。如下图,通过pp系统评价两种针对HIV整合酶的化合物功能,compound B显示很好的整合酶抑制功能,而compound C却显示很弱的整合酶抑制功能。
②兴趣点在基因导入上,可以通过病毒基因操作,运用人工制作的pp作为载体,将目的基因导入宿主细胞,制作稳定表达细胞系。因此可以成为基因治疗及miRNA持续表达载体,生物传感器等,人工制作的pp还可以作为病毒核酸检测内参照品及阳性标准品。如下图所示,人工制作的pp有很好的基因转导效率,在很低的moi值时,也几乎能做到100%感染。
 
 
作为“逆转录病毒载体”,其主要技术指数请参看下表:
 
 
兴趣点在病毒囊膜蛋白上人工制作的pp能功能性地呈现相关有包膜病毒的囊膜蛋白,具备相关病毒的感染特性。因此是某些高致病性病毒如高致病性禽流感病毒和某些难分离难培养病毒如丙肝病毒囊膜蛋白生物学功能研究的最佳替代品。被广泛用于这些病毒囊膜蛋白的功能学研究,中和抗体评价,抗病毒进入药物评价和受体研究中。如下图所示,运用人工制作的流感病毒pp技术可以很好的研究不同流感病毒血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)配伍关系,能预测流感病毒囊膜蛋白重配规律。同时,该图还显示通过人工制作的流感病毒pp可以直接从功能上观察插入突变对囊膜蛋白生物功能的影响。
 
服务内容:
①兴趣点在gag-pol蛋白上:Biovisualab能提供不同滴度的HIV或者MLV pp,满足:1)抗HIV gag-pol功能药物筛选;2)逆转录病毒逆转录、整合过程相关研究等。
 
②兴趣点在基因导入上:Biovisualab能根据用户需要提供相应服务以满足:1)稳定表达细胞系制作;2)基因治疗载体;3)miRNA持续表达;4)生物传感器;5)病毒核酸检测内参照品、阳性标准品等。
 
③兴趣点在病毒囊膜蛋白上:Biovisualab能根据用户需要提供相应服务以满足:1)蛋白功能学分析;2)中和抗体评价;3)抗病毒进入药物评价;4)受体研究等。
Biovisualab 欢迎用户联系我们的技术支持团队,为用户精心设计、完善研究。洽谈请拨打:021- 52231599,或者15000557195.
 
技术优势:
Biovisualab拥有一批病毒专家,在逆转录病毒组装系统的系列技术上有着丰富的经验,同时我们的技术团队熟练于基因操作,从原理、设计和病毒包装上确保任何项目的顺利实施。Biovisualab还在逆转录病毒颗粒制作、纯化、质控及感染力上拥有自己多项保密的技术。
 
服务周期:
4~10周。
 
收费:
根据具体情况而定,主要涉及质粒构建、病毒颗粒包装、滴度、项目内容等。

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