定量RT-/PCR标准品/参照品
RT-/PCR检测诊断步骤主要有:
1、样品采集储存;
2、样品处理提取核酸;
3、如果是RNA,需要逆转录为cDNA;
4、cDNA/DNA模板扩增;
5、检测扩增。
标准品的必要性
在PCR反应过程中,检测反应体系中荧光信号(探针或染料)连续不断的变化,当信号增强到某一阈值时(根据荧光信号基线的平均值和平均标准差,计算出以99.7%的置信度大于平均值的荧光值,即为阈值),循环次数即循环阈值Ct (cycle threshold,Ct)被记录下来。该循环参数Ct和PCR体系中起始模板数的对数之间有严格的线性关系,利用不同梯度的阳性定量标准品扩增的Ct值和该阳性定量标准的模板数经过取对数作线性回归 ,制成标准曲线 ,再根据待测样品的 Ct值就可以准确的确定起始模板的数量,所以根据PCR反应液的的荧光强度即可计算出初始模板的数量。
标准品的种类
DNA:基因组DNA/质粒/PCR产物
RNA:Total RNA & cDNA/体外转录RNA/PCR产物或质粒,更好的是携带RNA靶标的缺陷型MS2噬菌体
DNA:基因组DNA/质粒/PCR产物
RNA:Total RNA & cDNA/体外转录RNA/PCR产物或质粒,更好的是携带RNA靶标的缺陷型MS2噬菌体
本公司根据用户需求提供DNA标准品定制服务(质粒),RNA标准品定制服务(缺陷型MS2噬菌体)。
参照品的必要性
从样品开始,到PCR过程结束,每一个步骤都会影响最后的检测结果,特别是针对RNA。在这些过程中,存在各种理化学环境因素,这些环境因素可能来源于采样不合格,核酸抽提时化学试剂酚类、盐和乙醇等在核酸洗脱液中的残留等造成,也可以起源于样本本身的内在因素造成,如血红素、白细胞DNA、肝素、胆汁和抗体等。另外,保存、运输环境中RNA酶和温度等引起的目标病毒核酸自身降解也不容忽视。因此,为了反映核酸检测结果的可靠性和排除各种理化学环境因素引起的假阴性结果,在样品中设置参照品(包括内参照品和阳性参照品)是核酸定性定量检测中不可缺少的部分。
本公司根据用户需求提供DNA参照品定制服务(质粒),RNA参照品定制服务(缺陷型MS2噬菌体)。
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