产品内容

4 in 1 R/DdDp Polymerase               2.5U/ul

2×4 in 1 R/DdDp Buffer                                               

特性

真正的one-step RT-PCR

4 in 1 R/DdDp Polymerase具备以RNA为模板合成cDNA能力的同时还具备很好的DNA聚合酶功能，因此对于RNA的RT-PCR来说4 in 1 R/DdDp Polymerase是真正的一步法，其逆转录过程和PCR扩增过程可以真正实现同一个酶，同一反应体系，同一反应管内完成。

高度的cDNA扩增效率

研究显示，4 in 1 R/DdDp Polymerase与Taq酶相比，其以cDNA为模板进行PCR反应的能力高出100倍（Biochemistry, 1991, vol30:7661-7665）。

逆转录可以在60℃进行

逆转录在60℃进行意味着：1）逆转录引物能高特异性与模板结合从而确保逆转录过程的特异性；2）能减少RNA二级结构形成，易于逆转录反应发生。

无RNase H功能

4 in 1 R/DdDp Polymerase无RNase H功能，因此没必要担心其在反应过程中对RNA模板的破坏作用。

良好的dNTP耐受性

4 in 1 R/DdDp Polymerase能以各种修饰的dNTPs为底物实施PCR反应。与对应的Uracil-DNA glycosylase（UNG/UDG）配合使用是防止PCR产物污染的最佳选择。

耐受苯酚

4 in 1 R/DdDp Polymerase可以耐受高至15%(v/v)苯酚，对于采用苯酚类抽提的核酸，可以忽略苯酚对后续反应的影响。

用途

4 in 1 R/DdDp Polymerase主要适用于：

1）临床RNA相关检测试剂盒；

2）高通量RNA定性、定量研究。

使用方法（用户需自备：dNTP Mix、 dd H₂0、DNA模板、引物 ）

50ul反应体系的配制：

2× 4 in 1 R/DdDp Buffer                               25ul

dNTPs Mix (10mM each)                            1ul

模板                                                         x ul

正向引物(10uM)                                       1~2.5ul

反向引物(10uM)                                       1~2.5ul

4 in 1 R/DdDp Polymerase                            2.5U

Total                                                            50ul

反应条件：

1kb产物时

60-65℃                                                     5-30min

95℃                                                          1min.

94℃                                                          10sec.

55-65℃                                                     10-30sec.

72℃                                                          1kb/1min

建议35~40循环

建议

4 in 1 R/DdDp Polymerase在Mn²⁺存在下显示逆转录活性，但是其DNA聚合过程中的错配率会因为Mn²⁺存在而增加，因此其主要应用于核酸尤其是RNA检测。

实施实时荧光定量PCR检测时，需要对逆转录时间及温度，引物、探针的特异性、最佳工作浓度、最佳退火温度、最佳延伸时间等每个细节实施调整来实现检测的可靠性。一旦确立了最佳反应体系及工作条件后，4 in 1 R/DdDp Polymerase与常规one-step RT-PCR相比，其便捷高性能才能得到很好的体现。

活性定义

75℃，30分钟, 摄入10nMol的全核苷酸使其成为酸性不溶物的活性为1U。

保存

-20℃恒温保存1年 

运输：

2-8℃