One-Step Fast RT-PCR Mix 是first cDNA合成试剂及快速、高效PCR试剂的预混液。

产品内容

One-Step Fast RT-PCR mix 2×

特性

First cDNA由Reverse transcriptase合成，通过分子操作手段增加了该酶的热稳定性及逆转录效率，能高效迅速地将5kb以下的RNA模板转化成cDNA。PCR过程由SuperFast DNA polymerase完成。该酶具有卓越的扩增效率和反应性能，能在短时间内对GC rich模板进行高效扩增。SuperFast DNA polymerase扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可以直接克隆于T载体中。

用途

快速、高效RT-PCR的首选。

应用指导

使用方法

使用前请先将试剂混匀并离心，再配制反应体系。

50ul反应体系的配制：

2×One-Step Fast RT-PCR mix           25 ul

模板                                               50pg-500ng (viral or total RNA)

正向引物(10uM)                             1~2.5ul

反向引物(10uM)                             1~2.5ul

ddH2O补充至总反应体积            50ul

反应条件：

42℃或50℃                                  15min~30min

94℃                                   1min

94℃                                   10sec.

55-65℃                                           30sec.

72℃                                   4-6kb/1min

35~40循环

注意

随机引物及Oligo dT引物并不是逆转录成功的保证，因此本试剂盒不包括随机引物及Oligo dT引物。

由于复杂结构的RNA可能对逆转录过程产生影响，对于复杂结构的RNA模板，建议将RNA样本先进行热变性处理（65℃，5min处理后立即冰浴）,然后再进行逆转录反应。

SuperFast DNA polymerase延伸速度为4kb/min，延伸时间过长有时会产生拖尾效应，可缩短延伸反应时间来解决这一问题。

保存

-20℃恒温保存6个月

运输：

2-8℃