产品内容：

SuperTolerant DNA polymerase                           5U/ul

2×SuperTolerant Buffer

特性：

SuperTolerant DNA polymerase具有超强的理化学环境耐受性。能够直接对血液、尿和土壤等粗样品进行PCR反应，无需对DNA提纯。在50ul的反应体系中能够耐受高达20%的全血。具有高效快速的聚合能力，其产量高，扩增时间短。

产品说明：

SuperTolerant DNA polymerase是一种全新的PCR酶，他的表现超越市面上所有Taq DNA 聚合酶。因为它所拥有的DNA结合域缩短了延伸时间，提高了产量，并将保真度提升到Taq聚合酶的2倍；加之其他改造使其对PCR反应干扰因子耐受性显著提高。

用途：

血液、尿、菌液和土壤等粗样品高通量快速直接PCR。

应用指导：

使用方法（用户需自备：dNTP Mix、 dd H₂0、DNA模板、引物 ）

SuperTolerant DNA polymerase其标准延伸时间为4-6kb/min，由于血液和土壤样本中存在抑制物，延伸时间要适当延长，预变性时间可稍延长至3-5min。

50ul反应体系的配制：

2×SuperTolerant Buffer                             25ul

dNTPs Mix (10mM each)                         1ul

样品                                                      <10ul

正向引物(10uM)                                   1~2.5ul

反向引物(10uM)                                   1~2.5ul

SuperTolerant DNA polymerase                   5U

ddH2O补充至总反应体积50ul。

反应条件：

94℃                                                          3min

94℃                                             20sec.

55-65℃                                                      30sec.

72℃                                             0.5-2kb/min

35~45循环

72℃                                                          2min

实施例：

慢性HBV感染患者血清，运用SuperTolerant DNA polymerase直接实施PCR检测结果，产物大小为1000bp。

建议

1）引物浓度以终浓度0.2-0.9uM为参考范围。扩增效率低的情况下，可提高引物浓度；如果出现非特异片段，可降低引物浓度，来优化反应体系。

2）本产品SuperTolerant Buffer已经特别优化无需在另外添加镁离子。

3）在对未提取DNA样品进行扩增时，由于这些样品中大都存在抑制物，影响酶的聚合反应，所以建议延伸时间设置为0.5-2kb/min。

克隆策略

SuperTolerant DNA polymerase扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可以直接克隆于T载体中。由于该酶不具有3’-5’外切酶活性的校正功能，会出现碱基错配，所以不推荐使用其进行精确克隆。

活性定义：

75℃，30分钟, 摄入10nMol的全核苷酸使其成为酸性不溶物的活性为1U。

保存：

-20℃恒温保存6个月

运输：

2-8℃