产品内容：

Taq DNA polymerase     5U/ul

10× PCR Buffer

50mM MgCl₂                                                       

特性：

Taq DNA polymerase具有聚合能力强，可信度高，可扩增多种来源的模板，能够掺入dUTP、dITP和荧光标记的核苷酸，并具有高性价比。

产品说明：

Taq DNA polymerase是一种耐热的聚合酶。该酶具有5’-3’聚合酶活性和5’-3’核酸外切酶活性，无3’-5’外切酶活性，扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，因此可直接克隆于T载体中。

用途：

常规PCR，微阵列分析，高通量PCR，菌落PCR

使用方法（用户需自备：dNTP Mix、 dd H₂0、DNA模板、引物 ）

使用前请先将试剂混匀并离心，再配制反应体系。酶制品含有50%甘油，使用时需慢慢吸取。

以下为常规PCR反应体系和反应条件。

50ul反应体系的配制：

10× PCR Buffer                                         5ul

MgCl₂          (50mM)                                 1.5ul

dNTPs Mix (10mM each)                             1ul

模板                                                         1-100ng（质粒）

50-1000ng（基因组）

正向引物(10uM)                                       1~2.5ul

反向引物(10uM)                                       1~2.5ul

Taq DNA polymerase                                  5U

ddH2O补充至总反应体积50ul。

50ul反应体系的配制：

94℃                                            1min

94℃                                            20sec.

55~65℃                                                    30sec.

72℃                                            1kb/min

建议35~40循环

72℃                                                         5~10min

建议

1）引物浓度以终浓度0.2-0.9uM为参考范围。扩增效率低的情况下，可提高引物浓度；如果出现非特异片段，可降低引物浓度，来优化反应体系。

2） Mg²⁺浓度以终浓度1.2-3mM作为参考范围，本产品10×Taq Buffer中不含Mg²⁺，常规使用终浓度1.5mM MgCl₂也可根据不同引物和模板浓度来调节Mg²⁺浓度，由此优化反应体系。

3）退火温度应设定一般比Tm值低5-10℃。如无法得到理想的扩增效率时，可再降低退火温度。如果出现杂带时可提高退火温度。

4）延伸时间应根据目标片段大小进行调整，当扩增片段＜1kb时延伸时间可设在30sec内；当扩增片段＞1kb时，延伸时间最适为1kb/min。

5）循环次数可根据目的进行选择，如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环数太多，错配几率会增加，非特异性扩增严重。应在保证产物量的前提下，尽量减少循环次数。

克隆策略

Taq DNA polymerase扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，可以直接克隆于T载体中。由于该酶不具有3’-5’外切酶活性的校正功能，会出现碱基错配，所以不推荐使用其进行精确克隆。

活性定义：

75℃，30min, 摄入10nmol的全核苷酸使其成为酸性不溶物的活性为1U。

保存：

-20℃恒温保存1年

运输：

2-8℃