产品内容

HiFiFast DNA polymerase                 2.5U/ul

10×HiFi Buffer                                 

50mM MgCl₂                                    

特性

高保真性

HiFiFast DNA polymerase具有卓越的3’-5’核酸外切酶活性，因此其在DNA聚合过程中显示出超强的DNA校正功能，是目前保真性最高的DNA聚合酶。其保真性是Taq DNA聚合酶的50倍， Pfu DNA聚合酶的6倍以上。

高合成速度

HiFiFast DNA polymerase延伸速度是Taq的2倍、Pfu的6倍。

高耐热性

HiFiFast DNA polymerase具有超强的耐热特性，酶活性半衰期在95℃及100℃分别能达到12小时及3小时以上，因此在实际运用时可适当调高热变性步骤的温度，对于GC含量高的样本显示出卓越的DNA聚合功能。

用途

HiFiFast DNA polymerase的高保真性和高耐热性使其能将DNA通过PCR忠实扩增，特别适用于对保真性要求高的DNA扩增，如基因精确克隆、定点突变、SNP分析等。HiFiFast DNA polymerase的高合成速度大大缩短了PCR反应时间，能在2小时内完成6kb DNA的高效、精确扩增。

应用指导

使用方法（用户需自备：dNTP Mix、 dd H₂0、DNA模板、引物）

使用前请先将试剂混匀并离心，再配制反应体系。酶制品含有50%甘油，使用时需慢慢吸取。

50ul反应体系的配制：

10×HiFi Buffer                                    5ul

MgCl₂          (50mM)                         1.2ul

dNTPs Mix (10mM each)                    1ul

模板                                                1-100ng（质粒）

10-1000ng（基因组）

正向引物(10uM)                               1~2.5ul

反向引物(10uM)                               1~2.5ul

HiFiFast DNA polymerase                   2.5U

ddH₂O补充至总反应体积50ul。

反应条件：

2kb-6kb target

95℃                                    1min

95℃                                    20sec.

55-65℃                                           30sec.

74℃                                   1kb/30sec

建议35~40循环

<1kb

95℃                                                20sec.

55-68℃                                           30sec.

建议35~40循环

注意

HiFiFast DNA polymerase延伸速度为2kb/min，延伸时间过长有时会产生拖尾效应， 可缩短延伸反应时间来解决这一问题。模板GC含量过高时，可使用98℃进行变性反应来实施扩增。

克隆策略

HiFiFast DNA polymerase产物属平滑末端，无3’端突出，不可直接用于TA克隆，建议按下述策略实施克隆：

1）   可运用InFusion方法将PCR产物直接链接到终载体上。

2）   运用引物将克隆酶切位点导入PCR产物后实施酶切后克隆。

3）   运用平端载体实施克隆，使用的引物5’端磷酸化碱基可直接克隆于平滑末端的载体；如果使用的引物5’端没有特别进行磷酸修饰，可将PCR产物磷酸化处理后直接克隆于平滑末端的载体。

4）   将PCR产物进行加A反应，直接应用TA克隆。在PCR反应结束后，每个反应体系中加入5U Taq酶（Cat. Z011-1000），70-75℃培育15-30分钟即可。

活性定义

75℃，30min, 摄入10nmol的全核苷酸使其成为酸性不溶物的活性为1U。

保存

-20℃恒温保存1年

运输

2-8℃